Perfil de susceptibilidade antimicrobiana e identificação de patotipos diarreiogênicos entre amostras de Escherichia coli isoladas de alimentos / Antimicrobial susceptibility profile and identification of pathotypes diarrheagenic between Escherichia coli strains isolated from food

O presente estudo objetivou avaliar o perfil de susceptibilidade antimicrobiana e a ocorrência de patotipos diarreiogênicos (E. coli entoropatogênica/EPEC, E. coli enterotoxigênica/ETEC, E. coli produtora de shiga toxina/STEC, E. coli enteroinvasiva/EIEC e E. coli enteroagregativa/EAEC) em amostras de Escherichia coli, isoladas de diversos alimentos destinados ao consumo humano e naqueles envolvidos em surtos de Doença de Transmissão Alimentar (DTA), em Minas Gerais, Brasil. O perfil de susceptibilidade antimicrobiana das amostras de E. coli foi avaliado por meio da técnica de Concentração Mínima Inibitória e os patotipos de E. coli diarreiogênica pela Reação em Cadeia de Polimerase, utilizando-se os marcadores de virulência eae, bfpA, eltB, estA, st1, stx1, stx2, ipaH e aatA. Dentre as 220 amostras de E. coli analisadas, 60 (27,3%) apresentaram-se resistentes ou com resistência intermediária. Entre estas, oito (13,3%) foram consideradas multirresistentes. Os fármacos amicacina e gentamicina foram os mais eficazes, diferentemente da ampicilina, que apresentou o maior percentual de amostras resistentes (10,9%). Não foram identificados os patotipos de EPEC, STEC, EIEC e EAEC. Duas amostras de E. coli (0,9%), isoladas de um salgado (pão de queijo) e de uma refeição mista (galinhada), foram classificadas como ETEC. Ambas albergavam os marcadores de virulência eltB, estA e st1. Estas foram caracterizadas como pertencentes sorotipos O9:H10 e O9:H33. Conclui-se que entre as amostras de E. coli, isoladas de alimentos destinados ao consumo humano em Minas Gerais e naqueles envolvidos em surtos de DTA, existem de amostras consideradas multirresistentes e diarreiogênicas.

This study aimed to evaluate the profile of antimicrobial susceptibility and the occurrence of diarrheagenic pathotypes (E. colientoropatogênic/EPEC, E. coli enterotoxigenic/ETEC, E. coli producing shiga toxin/STEC, E. coli enteroinvasive/EIEC and E. colienteroaggregative/EAEC) in Escherichia coli isolated from different foods intended for human consumption and those involved in foodborne disease outbreaks, in Minas Gerais, Brazil. The antimicrobial susceptibility of strains of E. coli was evaluated by the Minimum Inhibitory Concentration technique and pathotypes of E. coli diarrheagenic by polymerase chain reaction, using the virulence markers eae, bfpA, eltB, st1, stx1, stx2, ipaH and aatA. Among the 220 strains of E. coli analyzed, 60 (27.3%) were resistant or intermediate resistance. Among these, eight (13.3%) were considered multiresistant. The amikacin and gentamicin drugs were the most effective, unlike ampicillin, which had the highest percentage of resistant strains (10.9%). Pathotypes of EPEC, STEC, EIEC and EAEC were not identified. Two strains of E. coli (0.9%) isolated from a salty (cheese bread) and a mixed meal (chicken meal) were classified as ETEC. Both harbored the virulence markers eltB, estA and st1. These were characterized as serotypes O9:H10 and O9:H33. We conclude that among samples of E. coli, isolated from foods for human consumption in Minas Gerais and those involved in outbreaks of DTA, there are samples considered multiresistant and diarrheogenic.

Evaluation of polymeric PLGA nanoparticles conjugated to curcumin for use in aPDT

ABSTRACT Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) involves the association of a photosensitizing agent with a light source with the goal of causing apoptosis or microbial lysing. The use of compounds with natural active principles is gaining prominence throughout the world. Several studies from groups that are linked to the development of innovations in the pharmaceutical market have used natural dyes, such as curcumin, the efficacy of which has been demonstrated in aPDT trials. Difficulties related to physicochemical stability, solubility and cell penetration are some of the challenges associated with this field. The present work aimed to prepare, investigate the characteristics and improve the photodynamic activity of PLGA-based nanoparticles loaded with curcumin for use in aPDT therapy. Using the simple technique of emulsion during the evaporation of a solvent, the particles were built, characterized and tested against microorganisms with importance for medicine and dentistry. The results revealed that the particles were able to protect the curcumin against degradation and eliminate some microorganism species at nanomolar concentrations.

Antagonistic activity expressed by Shigella sonnei: identification of a putative new bacteriocin

Bacteriocins are antibacterial, proteinaceous substances that mediate microbial dynamics. Bacteriocin production is a highly disseminated property among all major lineages of bacteria, including Shigella. In this paper, we addressed the purification and characterisation of a bacteriocin produced by a Shigella sonnei strain (SS9) isolated from a child with acute diarrhoea. The substance was purified through ammonium-sulphate precipitation and sequential steps of chromatography. The intracellular fraction obtained at 75% ammonium sulphate maintained activity following exposure to pH values from 1-11 and storage at -80ºC for more than two years and was inactivated by high temperatures and proteases. The molecular mass of the purified bacteriocin was determined by mass spectrometry to be 18.56 kDa. The N-terminal sequence of the bacteriocin did not match any other antibacterial proteins described. A putative new bacteriocin produced by S. sonnei has been detected. This bacteriocin may represent a newly described protein or a previously described protein with a newly detected function. Considering that SS9 expresses antagonism against other diarrhoeagenic bacteria, the bacteriocin may contribute to S. sonnei virulence and is potentially applicable to either preventing or controlling diarrhoeal disease.

Shigella in Brazilian children with acute diarrhoea: prevalence, antimicrobial resistance and virulence genes

Diarrhoeal disease is still considered a major cause of morbidity and mortality among children. Among diarrhoeagenic agents, Shigella should be highlighted due to its prevalence and the severity of the associated disease. Here, we assessed Shigella prevalence, drug susceptibility and virulence factors. Faeces from 157 children with diarrhoea who sought treatment at the Children's Hospital João Paulo II, a reference children´s hospital in Belo Horizonte, state of Minas Gerais, Brazil, were cultured and drug susceptibility of the Shigella isolates was determined by the disk diffusion technique. Shigella virulence markers were identified by polymerase chain reaction. The bacterium was recovered from 10.8% of the children (88.2% Shigella sonnei). The ipaH, iuc, sen and ial genes were detected in strains isolated from all shigellosis patients; set1A was only detected in Shigella flexneri. Additionally, patients were infected by Shigella strains of different ial, sat, sen and set1A genotypes. Compared to previous studies, we observed a marked shift in the distribution of species from S. flexneri to S. sonnei and high rates of trimethoprim/sulfamethoxazole resistance.

Acute diarrhea associated with Salmonella enterica in Belo Horizonte-MG: prevalence and characterization of isolates / Diarreia aguda associada a Salmonella enterica em Belo Horizonte-MG: prevalência e caracterização das amostras isoladas

Introduction: Acute infectious diarrhea is still regarded as a public health problem associated with a wide range of etiologic agents, from which Salmonella enterica is particularly worth mentioning inasmuch as it is a major cause of inflammatory diarrhea in both developed and developing countries. Objective: To assess the distribution of S. enterica among children with acute diarrhea in Belo Horizonte and to characterize bacterium isolates. Material and methods: The study group comprised a total of 157 children from low socioeconomic background. Stool samples were collected for leukocyte analysis and Salmonella bacterial culture. The isolates were serotyped and evaluated as to antimicrobial susceptibility profile, extended-spectrum â-lactamases (ESBL) production, and presence of virulence markers (invA, iroB, and spvC). RESULTS: A total of 5/3.2% children were infected by S. enterica, 3/60% by S. enterica Typhimurium, 1/20% by S. enterica Enteritidis and 1/20% S. enterica subsp. enterica serotype 8.20:z4,z23:-. Fecal leucocytes were detected in two out of five fecal specimens positive for S. enterica. Isolates from three children were resistant to nalidixic acid, nalidixic acid + chloramphenicol, and nalidixic acid + chloramphenicol + ampicillin. ESBL production was not detected. All samples presented invA and iroB genes. spvC marker was observed in isolates from two children infected by S. Typhimurium and S. Enteritidis. Conclusion: The results demonstrate that S. enterica infection is uncommon among children from our region. Furthermore, they indicate the need for periodic monitoring of bacterial antimicrobial susceptibility profile in order to establish suitable antimicrobial therapy when required.

INTRODUÇÃO: A diarreia infecciosa aguda é considerada um problema de saúde pública associado a uma ampla gama de agentes etiológicos, entre os quais destaca-se Salmonella enterica, causa importante de diarreia inflamatória em países desenvolvidos e em desenvolvimento. OBJETIVOS: Avaliar a distribuição de S. enterica em crianças com diarreia aguda em Belo Horizonte e caracterizar as amostras isoladas. MATERIAL E MÉTODO: O grupo de estudo consistiu de 157 crianças de nível socioeconômico baixo. Espécimes fecais foram empregados para pesquisa de leucóc itos e cultivo de Salmonella. As amostras isoladas foram sorotipadas e submetidas à avaliação do perfil de suscetibilidade a antimicrobianos, da produção de betalactamases de amplo espectro (ESBL) e da presença de marcadores de virulência (invA, iroB e spvC). RESULTADOS: Cinco/3,2% crianças apresentaram-se infectadas por S. enterica; três/60%, por S. enterica Typhimurium; uma/20%, por S. enterica Enteritidis; e uma/20%, por S. enterica subsp. enterica sorotipo 8,20:z4,z23:-. Leucócitos fecais foram detectados em dois dos cinco espécimes positivos para S. enterica. As amostras isoladas de três crianças apresentaram resistência a ácido nalidíxico, ácido nalidíxico + cloranfenicol e ácido nalidíxico + cloranfenicol + ampicilina. Nenhuma amostra produziu ESBL. Todas as amostras albergavam os genes invA e iroB. O marcador spvC foi observado em amostras isoladas de duas crianças infectadas por S. Typhimurium e S. Enteritidis. CONCLUSÃO: Os resultados demonstram que diarreia associada a S. enterica é raramente observada entre crianças da nossa região e indicam a necessidade de avaliação periódica do perfil de suscetibilidade a antimicrobianos da bactéria para orientar o estabelecimento de antibioticoterapia, quando indicada.

Prevalência baixa de adenovírus em crianças com diarreia em Belo Horizonte-MG / Low prevalence of adenoviruses in children with acute diarrhea in Belo Horizonte-MG

INTRODUÇÃO: Diversos microrganismos são reconhecidos como agentes de diarreia aguda, entre eles, os adenovírus, cuja associação com a doença apresenta variações geográficas e é pouco conhecida no Brasil. OBJETIVOS: Investigar a presença de adenovírus em fezes de crianças com diarreia aguda e sem diarreia, em Belo Horizonte-MG, e estudar os fatores epidemiológicos associados à adenovirose intestinal. MATERIAL E MÉTODOS: O teste imunocromatográfico qualitativo (kit VIKIA® Rota-Adeno, bioMérieux) foi utilizado para pesquisa de antígenos de adenovírus em amostras fecais obtidas de 268 crianças com diarreia aguda e 124 sem diarreia, em 2005 e 2006, no Hospital Infantil João Paulo II, Belo Horizonte-MG. Dados laboratoriais, clínicos e epidemiológicos foram registrados em banco de dados (SPSS Statistical package, IBM). RESULTADOS: Adenovírus foi detectado nas fezes de 16 crianças (4,1%): 12 (4,5%) com diarreia e quatro (3,2%) sem diarreia. A virose foi mais comum em meninas e a distribuição etária da infecção foi homogênea. Entre as 16 crianças com infecção pelo vírus, 11 (68,8%) tinham até 12 meses de idade. Entretanto, diferença significativa não foi observada para os parâmetros analisados. Distribuição sazonal da infecção por adenovírus não foi detectada. CONCLUSÃO: Nossos dados demonstram que a prevalência da adenovirose é baixa na população pediátrica no nosso meio.

INTRODUCTION: Several microorganisms, among them enteric adenovirus, are widely recognized as etiological agents of acute diarrhea. The association between adenovirus and the disease varies among geographical regions and is poorly known in Brazil. OBJECTIVES: To investigate the presence of adenovirus in stool samples from children with and without diarrhea in Belo Horizonte-MG. To study factors associated with enteric adenovirus infection. MATERIAL AND METHOD: A qualitative immunochromatographic assay (kit VIKIA® Rota-Adeno, bioMérieux) was performed to detect adenovirus antigens in stool samples from 268 children with acute diarrhea and 124 without diarrhea at Hospital Infantil João Paulo II from January/2005 to December/2006. Clinical, laboratory, and epidemiologic data were recorded in SPSS database (SPSS Statistical package, IBM). RESULTS: Adenovirus was detected in 16 samples (4.1%): 12 of them (4.5%) were from children with acute diarrhea and 4 of them (3.2%) from children without diarrhea. The viral infection was more prevalent among girls and the age distribution was homogenous. Among the 16 children infected by adenovirus,11 (68.8%) were younger than 12 months old. However, no significant statistical difference was observed within the analyzed parameters. There was no seasonal distribution of adenovirus infection. CONCLUSION: Our data demonstrate that the prevalence of enteric adenovirus infection is low among children with diarrhea in Belo Horizonte-MG.

Prevalência de Salmonella enterica em crianças com idade inferior a 5 anos com diarreia aguda e controles em Teresina-PI / Prevalence of Salmonella enterica in children aged less than 5 years with acute diarrhea and controls in Teresina-PI

We investigated the prevalence of Salmonella enterica (SE) among children (n = 400/250 with diarrhea) in Teresina-PI from 2004 to 2007. SE Newport was isolated from two samples and O-C2-C3-ND, Enteritidis, and Muenchen serological variants were isolated from one sample each. SE infection was more prevalent among children aged less than six months. Increased fecal volume, 3-10 evacuations/day, vomit and fever were reported for all cases. Resistance to nalidixic acid (NAL) and sulphamethoxazole-trimethoprim (SXT) was ubiquitous. Our data substantiate the need for monitoring SE infections worldwide and the emergence of antimicrobial resistance.

Foi estudada a prevalência de Salmonella enterica (SE) em crianças (n = 400; 250 com diarreia) em Teresina-PI, entre 2004 e 2007. SE Newport foi isolada de duas crianças e os sorotipos O-C2-C3-ND, Enteritidis e Muenchen foram encontrados em uma criança cada. A infecção foi mais comum em crianças com até 6 meses de idade. Volume fecal aumentado, três a 10 evacuações/dia, vômitos e febre foram relatados para todas as crianças. Foi comum resistência a ácido nalidíxico (NAL) e sulfametoxazol-trimetoprima (SXT). Nossos dados demonstram a necessidade de monitoramento da magnitude das salmoneloses em diferentes regiões do mundo e da emergência de padrões de resistência.

Microbiota indígena de seres humanos / Indigenous microbiota of human beings

As superfícies do corpo humano são colonizadas por uma comunidade de organismos, principalmente bactérias, que constitui a microbiota indígena. A composição desta microbiota se altera ao longo da vida e é influenciada por diversos fatores, tais como dieta e status imunológico do hospedeiro. A microbiota pode agir de maneira benéfica ou, em algumas situações, pode ser prejudicial para o indivíduo. Podem ser distinguidas a microbiota residente, constituída por organismos específicos, encontrados, freqüentemente, em determinadas áreas e a microbiota transitória, que consiste de microrganismos provenientes do ambiente, que habitam a pele e as superfícies mucosas por horas ou poucas semanas. Trato gastrointestinal, vagina, cavidade oral e pele possuem a microbiota mais rica e diversificada do corpo humano. O conhecimento da constituição da microbiota indígena é extremamente relevante para os médicos, principalmente para orientar a interpretação de resultados de exames microbiológicos e a escolha da terapia antimicrobiana empírica mais adequada. Deve-se salientar que a microbiota geralmente é benéfica. Por esse motivo, é fundamental que se tenha consciência dos riscos do rompimento da homeostasia entre microbiota e hospedeiro.

Body surfaces are colonized by a community of organisms that are recognized as indigenous microbiota, that is mainly constituted by bacteria. Its constitution changes with time and is influenced by several conditions such as diet and the immune status of the individual, among others. There are now evidences that the microbiota could be beneficial or, in some instances, dangerous to human health. It could be classified as resident, composed by fixed organisms, frequently found in certain areas, or as transitory, consisting of organisms from the environment that inhabits skin and mucosa for hours to few weeks. The gastrointestinal tract, vagina, oral cavity and skin show the richest and most diverse microbiota of the human body. The knowledge of the constitution of the indigenous microbiota is extremely important for clinicians, mainly because it can help them to interpret results of microbiological tests and to choose appropriate empirical therapy. It should be pointed out that microbiota is, in general, harmless and beneficial; for these reason, physicians must keep in mind that the disruption of the homeostasis between microbiota and host should be avoided.

Associaçäo entre cagA e alelos do vacA de Helicobacter pylori e úlcera duodenal em crianças no Brasil / VacA alleles, cagA, and duodenal ulcer in children in Brazil

Helicobacter pylory é o principal agente de gastrite em seres humanos e fator de risco para úlcera péptica e câncer gástrico. A evoluçäo da infecçäo está relacionada a diversos fatores, inclusive bacterianos, como presença de cagA e genótipo s1ðm1 do vacA, associados com o desenvolvimento de úlcera e adenocarcinoma gástrico. O objetivo deste estudo foi investigar a associaçäo entre cagA e alelos do vacA em H. pylori isolado de crianças e relacionar os achados com a doença apresentada pelo paciente. Foram estudadas 65 crianças (24 com úlcera duodenal e 41 sem úlcera gástrica ou duodenal). A pesquisa de cagA e de alelos do vacA foi feita por PCR em amostras da bactéria isoladas do estômago dos pacientes. Infecçäo mista foi identificada em dez (15,4 por cento) crianças. Entre os pacientes com monoinfecçäo, o alelo s1 foi detectado em amostras isoladas de 40 (72,7 por cento), e o m1 em 34 (61,8 por cento). CagA foi identificado em H. pylori isolado de 38 (69,1 por cento) pacientes. Foi observada associaçäo entre presença de cagA de genótipo s1ðm1 (p = 10ð7) e entre cagA e padräo s1ðm1 com úlcera duodenal (p = 0,073 e p = 0,037, respectivamente). Em conclusäo, infecçäo mista por H. pylori é comum em crianças brasileiras, e amostras da bactéria apresentando o alelo s1 e cagA säo as mais prevalentes no nosso meio. A concomitância do alelo s1 do vacA e de cagA foi freqüentemente observada, e a associaçäo de amostras positivas de s1 e de cagA com úlcera duodenal foi confirmada neste trabalho